Автономно воспроизводящаяся последовательность - Autonomously replicating sequence
Автономная репликация последовательность ( ARS ) содержит начало репликации в дрожжевом геноме . Он содержит четыре области (A, B1, B2 и B3), названные в порядке их влияния на стабильность плазмиды . A-домен является высококонсервативным, любая мутация отменяет функцию происхождения. Мутации на B1, B2 и B3 уменьшат, но не помешают функционированию источника.
Элемент A является высококонсервативным и состоит из консенсусной последовательности:
5'- T / ATTTAYRTTTT / A -3 '
(где Y либо пиримидин, а R либо пурин ). Когда этот элемент видоизменяется, ARS теряет всякую активность.
Как видно выше, ARS значительно богаты AT, что позволяет репликативным белкам легко нарушать H-связывание в этой области. Белковый комплекс ORC (комплекс распознавания ориджина ) связывается с ARS на протяжении всего клеточного цикла , обеспечивая доступ репликативным белкам к ARS.
Мутационный анализ дрожжевых элементов ARS показал, что любая мутация в областях B1, B2 и B3 приводит к снижению функции элемента ARS. Мутация в области A приводит к полной потере функции.
Плавление ДНК происходит внутри домена B2, индуцированное присоединением фактора связывания 1 ARS к B3. Домены A1 и B1 связываются с комплексом распознавания происхождения.
Для идентификации этих последовательностей дрожжевые мутанты, неспособные синтезировать гистидин, трансформировали плазмидами, содержащими His-ген и случайные фрагменты дрожжевого генома. Если фрагмент генома содержал точку начала репликации, клетки могли расти в среде без гистидина. Эти последовательности были названы автономно реплицирующимися последовательностями, потому что они реплицировались и унаследовались потомством без интеграции в хромосому хозяина .
