Autonoom replicerende sequentie - Autonomously replicating sequence
Een autonoom replicerende sequentie ( ARS ) bevat de oorsprong van replicatie van het gist genoom . Het bevat vier regio's (A, B1, B2 en B3), genoemd in volgorde van hun effect op plasmidestabiliteit . Het A-domein is sterk geconserveerd, elke mutatie heft de oorsprongsfunctie op. Mutaties op B1, B2 en B3 zullen afnemen, maar het functioneren van de oorsprong niet verhinderen.
Element A is sterk geconserveerd, bestaande uit de consensussequentie:
5'- T / ATTTAYRTTTT / EEN -3 '
(waarbij Y ofwel pyrimidine is en R ofwel purine is ). Wanneer dit element wordt gemuteerd, verliest de ARS alle activiteit.
Zoals hierboven te zien is, zijn de ARS aanzienlijk AT-rijk, wat het gemakkelijk maakt voor replicatieve eiwitten om de H-binding in dat gebied te verstoren. ORC-eiwitcomplex ( oorsprongherkenningscomplex ) wordt gedurende de celcyclus aan het ARS gebonden , waardoor replicatieve eiwitten toegang krijgen tot het ARS.
Mutatie-analyse voor de ARS-elementen van gist heeft aangetoond dat elke mutatie in de B1-, B2- en B3-regio's resulteert in een vermindering van de functie van het ARS-element. Een mutatie in de A-regio resulteert in een volledig functieverlies.
Het smelten van DNA vindt plaats binnen domein B2, geïnduceerd door aanhechting van ARS-bindingsfactor 1 aan B3. A1- en B1-domein binden aan oorsprongherkenningscomplex.
Om deze sequenties te identificeren, werden gistmutanten die niet in staat waren om histidine te synthetiseren , getransformeerd met plasmiden die het His-gen en willekeurige fragmenten van het gistgenoom bevatten. Als het genoomfragment een oorsprong van replicatie bevatte, konden cellen groeien in een medium zonder histidine. Deze sequenties werden genoemd autonoom replicerende sequenties, omdat ze gerepliceerd en geërfd door nageslacht zonder integratie in het gastheer chromosoom .
