Autonomicznie replikująca się sekwencja - Autonomously replicating sequence
Sekwencji autonomicznej replikacji ( ARS ) zawiera początek replikacji w drożdżach genomu . Zawiera cztery regiony (A, B1, B2 i B3), nazwane w kolejności ich wpływu na stabilność plazmidu . Domena A jest wysoce konserwatywna, każda mutacja znosi funkcję pochodzenia. Mutacje na B1, B2 i B3 będą się zmniejszać, ale nie będą przeszkadzać w funkcjonowaniu źródła.
Element A jest wysoce konserwatywny, składa się z sekwencji konsensusowej:
5'- T / ATTTAYRTTTT / A -3 '
(gdzie Y to pirymidyna, a R to puryna ). Kiedy ten element jest zmutowany, ARS traci całą aktywność.
Jak widać powyżej, ARS są znacznie bogate w AT, co ułatwia replikacyjnym białkom przerwanie wiązania H w tym obszarze. Kompleks białek ORC (kompleks rozpoznawania miejsca pochodzenia ) wiąże się z ARS przez cały cykl komórkowy , umożliwiając białkom replikacyjnym dostęp do ARS.
Analiza mutacyjna elementów ARS drożdży wykazała, że jakakolwiek mutacja w regionach B1, B2 i B3 skutkuje obniżeniem funkcji elementu ARS. Mutacja w regionie A powoduje całkowitą utratę funkcji.
Topienie DNA zachodzi w domenie B2, indukowane przez przyłączenie czynnika wiążącego ARS 1 do B3. Domena A1 i B1 wiąże się z kompleksem rozpoznawania miejsca pochodzenia.
Aby zidentyfikować te sekwencje, mutanty drożdży niezdolne do syntezy histydyny transformowano plazmidami zawierającymi gen His i losowe fragmenty genomu drożdży. Jeśli fragment genomu zawierał początek replikacji, komórki mogły rosnąć w pożywce pozbawionej histydyny. Sekwencje te nazwano sekwencjami replikującymi się autonomicznie, ponieważ były replikowane i dziedziczone przez potomstwo bez integracji z chromosomem gospodarza .
