Autonomt replikerende sekvens - Autonomously replicating sequence
En autonomt replikerende sekvens ( ARS ) indeholder replikationsoriginet i gær -genomet . Den indeholder fire regioner (A, B1, B2 og B3), navngivet i rækkefølge efter deres virkning på plasmidstabilitet . A-domænet er meget bevaret, enhver mutation afskaffer oprindelsesfunktionen. Mutationer på B1, B2 og B3 mindskes, men forhindrer ikke oprindelsens funktion.
Element A er meget konserveret og består af konsensus-sekvensen:
5'- T / ATTTAYRTTTT / A -3 '
(hvor Y enten er pyrimidin, og R enten er purin ). Når dette element muteres, mister ARS al aktivitet.
Som set ovenfor er ARS betydeligt AT-rige, hvilket gør det let for replikative proteiner at forstyrre H-binding i dette område. ORC-proteinkompleks ( oprindelsesgenkendelseskompleks ) er bundet til ARS gennem hele cellecyklussen , hvilket giver replikative proteiner adgang til ARS.
Mutationsanalyse for gær-ARS-elementerne har vist, at enhver mutation i B1-, B2- og B3-regionerne resulterer i en reduktion af ARS-elementets funktion. En mutation i A-regionen resulterer i et fuldstændigt tab af funktion.
Smeltning af DNA sker inden for domæne B2 induceret ved binding af ARS-bindingsfaktor 1 til B3. A1 og B1 domæne binder med oprindelsesgenkendelseskompleks.
For at identificere disse sekvenser blev gærmutanter ude af stand til at syntetisere histidin transformeret med plasmider indeholdende His-genet og tilfældige fragmenter af gærgenomet. Hvis genomfragmentet indeholdt en replikationsorigin, var celler i stand til at vokse i et medium, der manglede histidin. Disse sekvenser blev betegnet autonomt replikerende sekvenser, fordi de blev replikeret og nedarvet af afkom uden at integrere i værtskromosomet .
