Hae III - HaeIII
| Type-2 restriktionsenzym HaeIII | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
 Krystalstrukturen af HaeIII-enzym kompleksbundet til DNA: et ekstrahelisk cytosin og omarrangeret baseparring.
| |||||||
| Identifikatorer | |||||||
| Organisme | |||||||
| Symbol | haeIIIR | ||||||
| RefSeq (Prot) | WP_006996034.1 | ||||||
| UniProt | O68584 | ||||||
| Andre data | |||||||
| EF-nummer | 3.1.21.4 | ||||||
| Kromosom | Genomisk: 0,7 - 0,7 Mb | ||||||
| |||||||
| HaeIIIR | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Identifikatorer | |||||||||
| Symbol | RE_HaeIII | ||||||||
| Pfam | PF09556 | ||||||||
| InterPro | IPR019059 | ||||||||
| |||||||||
Hae III er et af mange restriktionsenzymer ( endonukleaser ), en type prokaryot DNA, der beskytter organismer mod ukendt, fremmed DNA. Det er et restriktionsenzym, der anvendes i molekylærbiologiske laboratorier. Det var den tredje endonuklease, der blev isoleret fra Haemophilus aegyptius- bakterierne . Enzymets genkendelsessted - det sted, hvor det skærer DNA- molekyler - er GGCC- nukleotidsekvensen , hvilket betyder, at det spalter DNA på stedet 5'-GG / CC-3. Genkendelsesstedet er normalt omkring 4-8 bps. Dette enzyms gen er blevet sekventeret og klonet. Dette gøres for at fremstille DNA-fragmenter i stumpe ender. HaeIII er ikke effektiv til enkeltstrenget DNA-spaltning.
Ejendomme
Hae III har en molekylvægt på 37126. Efter at en 2-10 gange Hae III finder sted, er der overfordøjelse af et DNA-substrat. Dette resulterer i, at 100% skæres, mere end 50% af fragmenterne ligeres, og mere end 95% bliver genudskrevet. Varmeinaktivering kommer til ca. 80 ° C i 20 minutter. Stedet for Hae III-enzymet er på AF05137 og er lineært med 957 basepar.
Historie
Hae III sammen med andre restriktionsenzymer blev opdaget i 1970 af Werner Arber og Matthew Meselson. Den Hae III Methyltransferase også kendt som MTase genet fra Haemophilus aegyptius (genkendelsessekvens: 5'-GGCC-3 ') blev fremstillet i Escherichia coli (E. coli) i plasmidet pBR322. Genet blev ekstraheret fra en enkelt Eco RI-fragment og et enkelt Hind III-enzym-fragment. Kloner, der bærer yderligere tilstødende fragmenter, viste sig at kode for Hae III-restriktionsenzymet.
Fungere
Enzymet spalter DNA'et ved de positioner, hvor GGCC-sekvensen findes. Spaltningen sker mellem det andet og det tredje nukleotid ( G og C ). De resulterende DNA-fragmenter er kendt som restriktionsfragmenter . HaeIII skærer begge DNA-tråde på samme sted, hvilket giver restriktionsfragmenter med stumpe ender . Varmedenaturering finder sted ved 80 ° C efter 20 minutter.
Methylase
Haemophilus aegyptius bærer også en methylase kaldet HaeIIIM ( P20589 ), der methylerer de interne cytosiner i GGCC-sekvensen. Det beskytter sekvenser mod at blive klippet af HaeIII og danner et restriktionsmodifikationssystem . HaeIII-enzym kommer fra en E. coli- stamme, der bærer det klonede HaeIII-modifikationsgen fra Haemophilus aegyptius.
Referencer
Yderligere læsning
- Rawn JD (1989). Biokemi (International red.). ISBN 0-89278-405-9 .
- Slatko BE, Croft R, Moran LS, Wilson GG (december 1988). "Kloning og analyse af HaeIII og HaeII methyltransferase generne". Gene . 74 (1): 45–50. doi : 10.1016 / 0378-1119 (88) 90248-x . PMID 3248732 .
- Blakesley RW, Dodgson JB, Nes IF, Wells RD (oktober 1977). "Duplexregioner i" enkeltstrenget "phiX174 DNA spaltes af en restriktionsendonuklease fra Haemophilus aegyptius" . Tidsskriftet for biologisk kemi . 252 (20): 7300–6. doi : 10.1016 / S0021-9258 (19) 66969-3 . PMID 71298 .
- Hoffman JL (juli 1986). "Kromatografisk analyse af den chirale og kovalente ustabilitet af S-adenosyl-L-methionin". Biokemi . 25 (15): 4444-9. doi : 10.1021 / bi00363a041 . PMID 3530324 .
| Denne EF 3.1 enzym -relaterede artikel er en stub . Du kan hjælpe Wikipedia ved at udvide den . |
